众所周知,限制光学显微镜的放大倍数的主要因素是可见光的波长。为了解决这一问题,激光共聚焦显微镜问世了,但是激光共聚焦显微镜仍然尤其局限性。受激光波长的影响,它的分辨率也只能到达亚微米级别。但是越来越多的领域研究开始向着纳米级别进发,这对于显微镜的发展又是一个新的挑战,人们开始寻找更小波长的光来代替激光,这个时候就出现了电子显微镜,利用电子束作为光源。但是电子显微镜虽然突破了传统光学显微镜的分辨率限制,也限制了可观察的样品仅限于切片。在生命科学领域,很多时候需要用活细胞或者组织作为观察样本。这个时候,超分辨显微镜开始出现在人们的视野中。
超分辨显微镜是在激光共聚焦显微镜的基础上所拓展的技术手段。其利用的是受激发射损耗(STED)技术。在常规光学显微系统当中,由于光学元件的衍射效应,平行入射的照明光经过显微物镜聚焦之后在样品上所成的光斑并不是一个理想的点,而是一个具有一定尺寸的衍射斑。在该衍射斑范围之内的样品均会由于被照明光照射而发出荧光,使得该范围内的样品细节信息没有办法被分辨,从而限制了显微系统的分辨能力。而利用STED显微技术,可以有效减小荧光发光面积。一个典型的STED显微系统中需要两束照明光,其中一束为激发光,另外一束为损耗光。其主要是通过引入一束损耗光以受激发射的方式来抑制有效荧光的发射,从而实现超衍射极限的分辨率。
超分辨显微系统的问世,无疑给生命科学研究领域带来了极大的助力。使得活体样本内的动态成像成为了可能。
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